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  • 微生物檢測標準操作程序

    1.0目的

    制定用于微生物測定的測試程序,以確定被測藥物的效力。

    2.0范圍

    該SOP應適用于微生物實驗室。

    3.0責任

    微生物學家
     

    4.0問責制

    部門主管 

    5.0程序

    5.1注意事項

    5.1.1所使用的玻璃器皿/杯r應進行消毒。
    5.1.2接種時,瓊脂的溫度應在45 – 50°C之間。
    5.1.3每次使用前后都要徹底清潔所有設備。
    5.1.4對于化驗瓶,請使用以下尺寸的不銹鋼或瓷瓶,每個尺寸的公差為±0.1毫米:外徑8毫米;內徑6毫米,長度10毫米。

    5.2測試程序

    5.2.1根據SOP
    5.2.2制備磷酸鹽緩沖液,準備用于測定的培養基。
    5.2.2.1準備待測抗生素所需的磷酸鉀緩沖液。該緩沖器被制備后滅菌,并且在每種情況中指定的pH值后的pH 滅菌
    5.2.2.2 0.1 m,pH 7.0的磷酸鉀緩沖液–將13.6 g磷酸氫二鉀和5.0 g磷酸二氫鉀溶解在1000 ml水中。用18 N磷酸或10 N氫氧化鉀調節pH值為7.0±0.2。

    5.3標準的制定

    要制備儲備溶液,請在該表中指定的溶劑中酌情溶解一定量的準確稱量的給定抗生素的USP參考標準品/工作標準品,或一小瓶USP參考標準品的全部內容物,然后如所示稀釋至所需濃度。存放在冰箱中并在指定的期限內使用。在檢測當天,從儲備溶液中制備五種或更多的測試稀釋液,連續溶液的濃度逐步增加,對于圓柱板檢測,通常以1:1.25的比例增加。使用指定的**終稀釋劑和序列,以使中間或中間值具有指定的濃度。

    5.4樣品制備

    從可用于待測制劑的信息(“未知”)中,為它分配每單位重量或體積的假設效價,并在此假設下,在檢測當天準備每種試劑所指定的儲備溶液和測試稀釋液抗生素,但**終稀釋劑與USP參考標準所用的相同。采用五種標準液含量的測定法,在假定濃度等于標準液中值含量的情況下,僅需要一種未知液即可。

    5.5接種物的制備

    5.5.1用3 ml無菌蛋白ept鹽水和無菌玻璃珠從**近生長的生物體傾斜或培養物中去除生長物。
    5.5.2將250 ml大豆消化瓊脂培養基的表面接種在Roux瓶的平坦面上。
    5.5.3借助無菌玻璃珠將懸浮液均勻地鋪在瓊脂表面上,并在上述溫度下孵育。孵育完成后,通過收集50 ml培養基35中的表面生長來制備儲備懸浮液
    。5.5.4確定稀釋因子,該稀釋因子將在約530 nm處產生25%的透光率。
    5.5.5對于圓柱板分析,通過試驗確定接種物中摻入的母液懸浮液的比例從圖中所示的體積開始,可以令人滿意地劃分抑制區,并給出可重現的劑量關系。通過將一部分原液懸浮液添加到已融化并冷卻至45至50的足夠量的瓊脂培養基中,并旋轉以獲得均勻的懸浮液,來制備接種物。

    5.6程序

    5.6.1在圓柱板分析中,基本比較限于板內區域直徑測量值之間的關系,不包括板在制備和后續處理中的變化。
    5.6.2圓筒板法
    在培養基35中加入約1毫升如上制備的接種物,將培養基倒入無菌培養皿中并使其硬化。
    5.6.3兩級析因分析。
    5.6.3.1在四個平板上分別準備平行稀釋液,其中包含2個水平的標準品(S1和S2)和未知物(U1和U2)。用不同的測試稀釋液,標準溶液和未知溶液分別填充其四個量筒。
    5.6.3.2將平板在30-35°C的直立位置孵育24至48小時。
    5.6.3.3將板在室溫下直立,并測量抑制區的直徑。
    5.6.4效價估算將
    每個稀釋區的直徑求和,并根據以下公式計算樣品的效%(以標準物為單位):
    效%=對數(2.0 + log I)
    其中a可能具有正值或負值,應代數使用,
    其中a = (U1 + U2)-(S1 + S2)
                      (U1 + U2)+(S1-S2)
    U1和U2是區域直徑之和與未知的高低水平。
    S1和S2是區域直徑與高低標準溶液的總和。
    “ I”是稀釋比例。
    5.6.5極限:根據各自的產品規格。
    5.6.6樣品的效價可通過表達式
    %效價x樣品的假定效價
                                100 計算得出

    6.0縮寫

    6.1 SOP –標準操作程序
    6.2°C –攝氏度
    6.3 M –道德
    6.4 G –克
    6.5 Ml –毫升
    6.6 U –單位
    6.7 ATCC –美**文化類型收集
    6.8%–百分比

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